HA和HI试验所用溶液和1%红细胞的配制

一、试验前准备工作

试剂：葡萄糖、柠檬酸、柠檬酸钠、氯化钠、氢氧化钠、磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠等试剂。

试验动物：三只SPF公鸡。

设备：天平、高压灭菌锅、采血器、量筒等。

二、样品稀释液配制方法

1、需配备A、B液两种

A液：0.2mol/L磷酸二氢钠水溶液：称取磷酸二氢钠27.6g，溶于蒸馏水中，定容至1000ml。

B液：0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液：称取磷酸氢二钠53.6 g，或十二水合磷酸二氢钠71.6 g，加蒸馏水溶解，最后定容至1000ml。

2、0.01 mol/L pH7.2 PBS液的配制：

取A液14mL，B液36mL，加NaCl 8.5g，用蒸馏水定容至1000 mL。经121℃士2℃、15min高压灭菌。

3、样品稀释液的配制：1000mlPBS加入青霉素2000U/mL、庆大霉素（50ug/mL）、霉菌抑制素（1000U/mL）和牛血清白蛋白（5mg/mL）或10%中体积的甘油。

4、阿氏液配制：称取葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.420g，加蒸馏水至100 mL，散热溶解后调节pH值至6.1，69kPa、15min高压灭菌，4℃保存备用。

三、1%鸡红细胞悬液

采集至少三只SPF鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液，与等体积阿氏液混合，用pH7.2的0.01 mol/L PBS洗涤3次，每次均以1000r/min离心10min，洗涤后用PBS配成1%（体积分数）红细胞悬液，2℃～8℃保存备用，保存时间一般不超过1周。

醛化红细胞：采集至少三只SPF鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液，与等体积阿氏液混合，用pH7.2的0.01 mol/L PBS洗涤3次，每次均以1000r/min离心10min，洗涤后用PBS配成1%（体积分数）红细胞悬液，滴加等体积的5%戊二醛PBS液，5分钟内滴加完毕，4℃下磁力搅拌45min，醛化后红细胞用纯水洗涤3次，最后用PBS配成1%醛化红细胞悬液，置2℃～8℃保存备用，保存时间可达3个月。

【注】依据禽流感诊断技术GB/T 18936-2025