两种虎红平板凝集试验检测羊布鲁氏菌病效果比较

摘要：为比较常规和改良虎红平板凝集试验（RBPT）的羊布鲁氏菌病检测效果，对239份免疫、非免疫场绵羊和阴性绵羊血清进行检测，并通过竞争ELISA试验（cELISA）和试管凝集试验（SAT）进行确诊。结果显示：常规RBPT检测非免疫血清的敏感性为68.85%，特异性为93.55%，与cELISA的符合率为77.17%；检测免疫羊血清的敏感性为75.81%，特异性为73.33%，与cELISA的符合率为75.00%。改良RBPT检测非免疫羊血清的敏感性为91.80%，特异性为70.97%，与cELISA的符合率为84.78%；检测免疫羊血清的敏感性为98.39%，特异性为10%，与cELISA的符合率为69.57%。两种RBPT和cELISA的阴性血清检测结果全部为阴性，符合率为100%。结果表明：改良RBPT法的敏感性要高于常规RBPT法，可以在阳性羊群中筛选到更多抗体效价较低的早期感染动物。但其特异性有一定程度的降低，必须结合SAT、cELISA等特异性高的方法进行确诊。本研究为羊布鲁氏菌病检测方法的选择提供了参考。

布鲁氏菌病（以下简称布病）是由布鲁氏菌属细菌引起牛、羊、猪、鹿、犬等多种哺乳动物和人类共患的一种传染病，为我国二类动物疫病。布病全球流行，已有 170 多个国家有人间和畜间布病病例的报道。动物布病以母畜流产和公畜睾丸炎为主要特征；人布病以发热、乏力、流产、睾丸炎等为主要症状，严重影响患者的生活质量，甚至丧失劳动能力和生育能力。该病严重影响畜牧业发展和人类健康。根据中国疾病预防控制中心公布的统计数据，2019 年我国人间布病新增病例 44 036 例，发病率高达 3.1/（10 万），同 2018 年的新增病例数相比增加了 16%。

我国现行的动物布病诊断技术标准（GB/T18646—2018）规定了多种布病血清学检测方法，如虎红平板凝集（RBPT）、试管凝集（SAT）、间接 ELISA（iELISA）、竞争 ELISA（cELISA）和补体结合（CFT）等试验方法。其中，RBPT操作简单、试剂便宜、试验耗时短，在基层兽医实验室的动物布病检测中应用非常广泛。但该方法也存在一定的缺陷：敏感性低于 ELISA、荧光偏振（FPA）、CFT 和胶体金；特异性也不高，需用SAT、ELISA 或 CFT 等进行确诊 。世界动物卫生组织（OIE）在发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》中推荐了一种改良的 RBPT 方法，用于对小反刍兽血清样品检测，即使用 3 倍血清与 1 倍虎红平板凝集抗原混合进行检测。而我国现行的诊断技术标准（GB/T 18646—2018）中的 RBPT 方法，则是使用等量的动物血清与虎红平板凝集抗原混合进行检测。为评价这两种 RBPT 方法对羊血清的布病检测效果，采用两种 RBPT 方法，对来自免疫羊场、非免疫羊场和布病阴性羊群的 239 份血清样品进行了检测，同时以 cELISA 和 SAT 进行符合检测。

1　材料与方法

1.1　血清样品

免疫场、非免疫场的绵羊血清各 92 份，采自内蒙古自治区，其中免疫场血清为 S2 疫苗注射免疫 10 个月后采集。阴性绵羊血清 55 份，采自辽宁省和河北省的阴性羊群。

1.2　试剂

布鲁氏菌 RBPT 抗原、SAT 抗原、cELISA 试剂盒，均购自中国兽医药品监察所。

1.3　方法

常规 RBPT、SAT（微量法）和 cELISA 试验，均按照我国动物布病诊断技术标准（GB/T 18646—2018）进行。改良 RBPT 试验，按照 OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》中检测小反刍兽疫的RBPT 方法，使用 75 μL 羊血清和 25 μL RBPT 抗原混合 4 min 后观察结果。对免疫、非免疫和阴性绵羊血清的两种 RBPT检测结果进行敏感性和特异性对比，并以 cELISA为“金标准”进行符合率对比。同时，对常规RBPT、改良 RBPT 和 cELISA 检测结果不一致的样品，采用 SAT（微量法）进行验证。

2　结果

2.1 RBPT 检测

在 239 份羊血清检测中，用常规 RBPT 检出44 份非免疫场、55 份免疫场阳性血清，而用改良RBPT 分别检出 65、88 份。55 份阴性血清均为阴性（表 1）。

 表1　两种 RBPT 检测羊血清样品结果    单位：份

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