抗生素药敏试纸制作与抑菌试验方法

由于抗生素新品种及其耐药性的不断涌现，需要在兽医临床治疗中进行药敏试验。但市场上又不易买到制作好的药敏纸片，这给药敏试验工作带来了一定的难度。

针对这种情况，笔者查阅了有关资料，结合本地实际，利用兽药的使用说明浓度，自制药敏纸片，通过数十次临床实践，效果较好。

1、纸片的制作及灭菌

选用质量较好的滤纸片(定量滤纸)，用打孔器打成直径为6毫米的圆片，每l00片放入一小瓶中，160℃干热灭菌1-2小时或高压灭菌后，在60℃条件下烘干备用。

2、抗菌药物浓度的配制

（1）计算最小浓度值 按药物使用说明上的配料或饮水比例换算成一个基本单位药量(以能准确称量药品的最小值为宜，如0.5克、l克、2克等)，而需要配多少料或饮多少水，则相当于配制浸泡药片的药品浓度时所加蒸馏水的毫升数。例如，药品使用说明上标明5克本品可拌50千克饲料，其换算方法为l克本品可拌10千克饲料，也就是1克本品拌l0000克饲料，相当于药品浓度为l克本品加l0000毫升蒸馏水。

（2）浓度配制 准确称取上述基本单位药量(片剂要研磨成粉末后再行称量)，在无菌条件下，按下列分列项用蒸馏水进行倍比稀释。根据以上换算l克本品加10000毫升蒸馏水，即l克本品加10×l0×10×l0毫升蒸馏水。如出现l克本品拌320克饲料等情况，可改成1克本品拌320克饲料，即加l0×4×8毫升蒸馏水。这样改动易形成分列项，并不影响实际效果。因为在配料时可按纸片浓度l克本品拌320克饲料进行拌料。如果所加蒸馏水量较少或现场蒸馏水充足，可不按上述倍比稀释法稀释，而直接按配料或饮水比例一次稀释而成。

3、药敏纸片的浸泡及保存

取l毫升已配制好的药液注入已灭菌的含l00片纸片的小瓶中，置冰箱内浸泡1-2小时后取出烘干，并置冰箱中保存备用(可保存6个月)。

4、链接- 抑菌试验方法

（1）试验方法

用接菌棒按无菌操作从病料中挑取病料接种于肉汤培养基并于37℃培养8～12小时后（菌液浓度一般用肉眼观察有轻微混浊即可使用），用接菌棒将含菌材料（肉汤）用密集均匀划线法，均匀接种于琼脂平板表面。直径为90毫米的培养皿接种菌液1ml，用灭菌镊子将含药滤纸片按标记位置轻贴在平板琼脂的菌层表面（必须一次放好，不得二次移动（见下图）。然后将平板底朝上置37℃温箱内培养18～24小时，观察结果。

（2）结果判断

用米尺测量抑菌圈直径大小。抑菌圈 >10毫米为低敏，>10～15毫米为中敏，>15毫米～20毫米为高敏，>20毫米为极敏，<10毫米为不敏感（细菌耐药）。

（3）注意事项

本试验须用无菌和无抗菌污染操作。