由新冠病毒核酸检测引发的兽医实验室核酸检测的思考

因此，核酸提取的操作人员应经过专业的培训，具备基本的分子生物学的相关知识和熟练的操作技能，仪器的规范使用等，避免人员因素和仪器因素对检测结果准确性的影响。

7、核酸扩增体系和质控的设置差异

核酸扩增体系一般采用国家标准推荐的反应体系和试剂，为了降低加样的影响，可适当扩大反应体系，如采用40μl或50μl的反应体系，或通过实验摸索适合本实验室检测的合适的反应体系。另外，每批次扩增建议设置一个弱阳性质控和三个阴性质控，且三个阴性质控的位置要随机放置在不同的位置，只有弱阳性质控检测为阳性，三份阴性质控全部检测为阴性，才视为在控，方可判定样品的检测结果，否则则为失控，应及时分析原因，然后重新采样、重复检测。在质控在控的条件下，同一份标本中出现不同的检测结果，也应分析原因，必要时重新检测样本。

8、试剂盒因素的影响

自应用PCR检测病原以来，出现了诸多的核酸检测试剂盒。不同厂家的试剂盒根据病毒基因的特异性序列设计的扩增引物和探针，包含有不同的靶基因位点的试剂检测灵敏度不同，特异性也不同，试剂中的酶和金属离子的成分与质量也存在差异，这些最终都将影响核酸的扩增效率和检测结果。如万圣等2017年报道对三种禽流感病毒核酸检测试剂盒比较，阳性检出率分别为70.0%、45.0%和45.0%。因此，不合适的试剂势必导致核酸提取失败，影响核酸检出率。因此，在进行批量检测前，一定要进行试剂盒的比对试验，选择灵敏度较高的试剂盒。

众所周知，RNA病毒容易在传播中发生变异，目前现有的试剂盒主要是针对病毒基因组的保守序列进行引物设计，由于我们对病毒的认知还存有一定的空白，病毒在进化过程中其保守序列是否会发生突变还不清楚，核酸的检测试剂也缺乏大规模的临床验证，若病毒RNA的引物设计区发生了突变，可直接导致检测结果不能呈现阳性。

三、提高兽医核酸检测效率的对策

1、提高采样和检测人员的理论素养和操作技能

对采样和检测人员进行系统的培训，使其在工作前能充分掌握兽医专业基础知识，对于常见病和多发病，了解其发病表现和病原的流行病学规律，这是准确采集病料的基本条件。同时，还要进行操作技能培训，尤其是样本的采集方法，样品的保存和运输要求，微生物的分离鉴定，核酸的检测流程、血清学检测方法等，正确规范的操作技能，不仅能有效防止感染性物质的扩散，保证样品的质量和检测效果，还能防护个人安全。

2、选择灵敏度和特异性较高的试剂盒

首选国家相关部门批准的核酸检测试剂盒，然后实验室对试剂盒检测能力验证分析，挑选灵敏度高、特异性强的试剂盒，作为本实验室检测购买的标准。另外，针对不同地区的发病情况，再一次筛选，选取适合病原微生物地方分型的检测试剂，这样尽可能的保证本实验室检测的阳性率和可靠性。另外，要选择合适的核酸质控品和标准物质，这些在检测标准化和敏感性评价中发挥着重要的作用。众所周知，相比于人类病毒核酸标准物质，动物病毒核酸的标准物质的研究明显滞后。现有的商品化病毒核酸检测试剂盒中，作为质控品的阳性对照多由厂家自行制备提供，缺乏统一的质量控制和量值标定，限制了其监控检测的性能，也难以满足不同试剂和不同实验室检测能力评价的需求。纵观目前动物病毒核酸质控品研制的特点和优缺点分析，以噬菌体为基础的内嵌病毒样颗粒与全病毒颗粒最接近，对动物RNA病毒核酸标准物质的研究和应用都有着较为广阔的前景。

3、规范和优化实验室核酸检测的流程

病毒核酸的检测是疾病确诊的关键步骤，采样和检测人员要充分做好生物安全防护的同时，必须要按照规范处理流程才能有效保障检测结果的准确性、可靠性。首先检测人员应在安全防护的条件下从运输箱中取出样本管，仔细核对采集的样品信息，标记和录入相关的信息；然后注意样本管外部消毒处理，病原的灭活；之后才能进入二级生物安全实验室进行相应的操作，必须在生物安全柜内打开样品管，根据试剂盒要求进行核酸的提取、扩增、数据分析、结果审核等操作。样品检测完成后要立即进行严格的终末消毒程序，如空气、工作台、地面、生物安全柜、样品转运箱等严格彻底地消毒。

4、优化配置实验室检测设备和人员

在条件允许的情况下，实验室检测区进行合理的划分，尽量确保专屋专用，仪器设备不共用，尤其是核酸检测分析室。另外，优化各项检测人员的管理，每项检测需有专门的人员负责，不交叉，不是本项检测的人员不得进入实验室该项目检测区域。

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