牛奶中青霉素残留检测方法

前    言

本标准按GB/T1.1—2000 《标准的结构和编写规则》进行编制

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口

本标准由四川省质量技术监督局批准

本标准起草单位：四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所

本标准主要起草人：杨松沛、彭莉、岳秀英、熊浩山、官艳丽、王海波、吴晓岚

 牛奶中青霉素残留检测方法--酶联免疫吸附测定(ELISA)法

范围

本标准规定了牛奶中青霉素残留量检测的制样和酶联免疫吸附测定法。

本标准适用于牛奶中青霉素的残留量的快速筛选检测。对于可疑样品需用确证法确认。

规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 1.1-2000 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则 (ISO/IEC Directives, Part 3, 1997, Rules for the structure and drafting of International Standards, NEQ)

GB/T 6682-1992  分析实验室用水规则和试验方法

农牧发[2003]1号  兽药残留试验技术规范（试行）

制样

样品的制备

取适量新鲜的空白或供试牛奶，涡旋混合使之均匀，密封。

样品的保存

-20℃以下冰箱中贮存备用。

测定方法

方法提要或原理

牛奶中残留的青霉素用PB缓冲液提取，酶联免疫吸附测定法测定,其基本原理是抗原抗体反应。酶标板的微孔包被有偶联抗原，标样或样品中的青霉素与酶标记抗原竞争青霉素特异性抗体。通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标记抗原。加入底物液，结合到板上的酶标记物将底物转化为有色产物。加入终止液，在450nm处测定吸光度值，吸光度值与试样中青霉素浓度呈反比。

试剂和材料

以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的二级水。  

正己烷

PB缓冲液的配制 称取51.6gNa₂HPO₄.12H₂O和8.7gNaH₂PO₄.2H₂O，用1000mL水溶解（pH=7.2）即可。

青霉素试剂盒（采用官方备案的试剂盒）

4.2.6.1  青霉素系列标准溶液  0mg/mL 、0.1mg/mL、0.3mg/ml、0.9mg/mL、2.7mg/mL、8.1mg/mL

4.2.6.2  酶标板  8条×12孔，包被有偶联抗原

4.2.6.3  酶标记物

4.2.6.4  青霉素抗体

4.2.6.5  底物溶液A

4.2.6.6  底物溶液B

4.2.6.7  浓缩洗涤液 临用前用水稀释二十倍作为洗涤液

4.2.6.8  终止溶液

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