畜禽养殖场作为动物疫病传播的源头,在疫病发生时及时进行病原诊断,采取相应的应对措施,是目前动物疫病防控的关键环节。 目前国内动物疫病的病原学诊断试剂选择范围有限。而在通用的血清学检测试剂中,绝大多数是检测血清中抗体的免疫试剂,其结果更多反应了疫苗免疫效果,对病原感染只能间接分析,无法确诊,何况动物在遭受感染后,病毒要在体内潜伏一段时间,动物才会产生抗体,检测结果往往滞后病原感染。能对野毒感染进行鉴别的成熟抗体检测试剂只有猪伪狂犬的gE抗体试剂盒,由于疫苗的纯化工艺问题,口蹄疫的非结构蛋白的抗体目前无法产生理论上的鉴别诊断作用。另一方面能监测疫病病原的试剂的商品化试剂偏少。免疫荧光抗体技术受限于基层养殖场荧光显微镜以及荧光标记抗体的缺乏,故在多数基层养殖试验室难以普及。由于达到市场需求的特异性及灵敏度并能配对的动物疫病抗体的缺乏,免疫试剂中目前的病原检测产品很少,这类产品开发的周期长,不确定性很大,很难应对基层疫病防控的需要。因此养殖场试验室亟需合适的病原学检测试剂。 鉴于基于核酸扩增的分子诊断技术发展迅速,荧光PCR及电泳PCR已经被农业部及各省市疫控单位逐步采用,扭转了疫病诊断中病原诊断技术空白的态势。但对养殖场基层试验室来说,PCR分子诊断技术的使用存在不少阻碍:1、分子诊断试剂一般要冷冻保存,成本高且运输半径有限;2、核酸提取步骤复杂缓慢,基层技术人员操作困难;3、基层单位无力购买价格偏高的PCR扩增仪,基层技术人员也不容易掌握仪器操作要领。因为这些难点的存在,分子诊断技术一直没有在我国养殖基层试验室普及。 快灵生物开发的基因试纸卡,开启了现场分子诊断步入养殖场的新时代。它包括基因提取试剂、恒温扩增试剂及免疫层析试纸卡三部分,能常温运输;在常温下同时完成 DNA/RNA样品提取,仅需微型离心机或专利磁力架10分钟内完成操作;添加样品模板后将反应管密闭后放置在变温金属浴上保温60分钟,扩增完成后将反应管插入试纸卡槽后一步按压就启动溶液层析,3-5分钟后即可目视层析试纸的线条显色判定结果。专利申请中的基因试纸卡解决了扩增产物溶液及其气溶胶的泄漏污染导致后续样品交叉污染的问题,开启了现场分子诊断步入了基层养殖场的新时代。基因试纸卡能直接检测到病原,很适合对健康携毒排毒的动物进行筛查,也适合对感染早期的动物进行确诊,大大缩短窗口期。此外,对于罕见病原或突然爆发的新病原,只要能在基因库中查询到该病原的基因序列,基因试纸卡能最快在一周内研发出来。该基因试纸卡的操作过程以专利磁力架,变温金属浴,两支移液枪为例说明如下图。 快灵生物的基因试纸卡检测盒的特点在于: 1.简单快速提取核酸:快灵生物的核酸提取试剂在常温下10分钟内能同时完成样品中DNA与RNA的提取。目前基因变异最快,危害性最大的疫病往往都是RNA病毒引起的。其他商业化RNA病毒提取试剂一般要求在低温冷冻条件下提取操作,基层单位往往无法实现。快灵生物经过无数次的实验摸索,终于配制了独特的基因提取试剂,仅需微型高速离心机或专利磁力架,10分钟内就能完成单份样品的核酸提取。我们已经在细菌病毒样品,全血与组织样品分别进行了DNA、RNA的提取实验,结果都很良好。简单的RNA提取试剂是基因试纸卡步入基层应用的基础。
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