陈金山，陈俊杰，吴玉苹，安志兴，葛亚明，银 梅，王丽荣，胡建和
（河南科技学院，河南新乡４５３００３） 摘 要：对经过流行病学调查、临床诊断、病理剖检、病原学检查确诊为猪圆环病毒感染的病猪放血处死，采集肺脏、脾脏、全身淋巴结等组织制作同源组织灭活苗。选取体重相近、有临床发病表现的仔猪１６０头，随机分成Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４组，其中Ａ 组为同源组织灭活苗＋兽大菌灭注射液，Ｂ 组为兽大菌灭注射液，Ｃ 组为杂症一针注射液，Ｄ 组为对照组，每组４０头。每天用药１次，连用３ｄ，在相同条件下进行饲养管理，结果Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４组的成活率分别为９５．０％、８０．０％、４５．０％、１７．５％。
关键词：猪圆环病毒；同源组织灭活苗；应用效果 猪圆环病毒（ＰＣＶ）属于圆环病毒科圆环病毒属。ＰＣＶ 包括ＰＣＶ１ 和ＰＣＶ２ 两种基因型，其中ＰＣＶｌ对猪无致病性，ＰＣＶ２ 能引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（ＰＭＷＳ）、猪皮炎与肾病综合征、繁殖障碍等疾病［１］。ＰＭＷＳ 患猪渐进性消瘦、呼吸困难、腹泻。怀孕母猪感染后经胎盘传染给仔猪。该病毒在我国猪场广泛存在并造成了巨大的经济损失［２３］。
本病目前没有较理想的治疗药物，疫苗也正在研制开发中。患猪可引起免疫抑制，并常与猪细小病毒（ＰＰＶ）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）发生混合感染，死亡率较高［４］。笔者采用同源组织灭活苗防控猪圆环病毒病，治愈率达９５．０％以上。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 动物来源 河南省新乡市某养猪场存栏５５８头，其中成年母猪６８头，哺乳期仔猪２６２头，断奶仔猪２４９头。２００９年３月哺乳期仔猪和断奶仔猪出现体质下降、消瘦、贫血、生长发育不良，呼吸困难，体温３７．５ ℃～３９．０ ℃；腹泻，初期是黄色粪便，３ｄ～５ｄ后拉灰黄色或灰白色水样粪便；耳背部和腹底部弥漫黑紫色的小点；发病率为６５．５％，死亡率为１３．５％。怀孕母猪有的出现流产、产死胎、弱仔等现象，但是饮食欲未出现异常表现。经流行病学调查、临床诊断、病理剖检、病原学检查确诊为猪圆环病毒病。从发病群体中挑选２头具有典型症状的病猪，放血处死，采集肺脏、脾脏、肠系膜淋巴结等组织，制作同源组织灭活苗。
１．１．２ 主要仪器与试剂 高速组织匀浆机，天平等。甲醛（分析纯）、叠氮钠，为沈阳化学试剂有限公司产品；２００ｇ／Ｌ 铝胶生理盐水，为成都精华生物制品有限公司产品。
１．１．３ 试验药物 兽大菌灭（主要成分为盐酸环丙沙星）、多价增效抗菌抗毒因子等，吉林省五星动物保健药厂生产，批准文号为兽药字（２００６）０７０１７２０７４。杂症一针（主要成分为黄芪多糖），天一诺法维它生物科技有限公司生产，批准文号为兽药字（２００７）１６０８５２７１２。
１．２ 方法
１．２．１ 同源组织灭活苗制备 无菌条件下采集病猪的肺脏、肝脏、脑及淋巴结等组织，用１０００Ｕ／ｍＬ的双抗溶液冲洗表面，除掉筋膜，切成小块，称取病料２５０ｇ，加入生理盐水，使干物质占２０％ ～３０％，高速组织匀浆机中搅拌１ ｍｉｎ～２ ｍｉｎ，再以２０００ｒ／ｍｉｎ匀浆４ｍｉｎ～５ｍｉｎ，用三层灭菌纱布过滤、分装，向其内加入等量６ｍＬ／Ｌ 甲醛、１ｇ／Ｌ 叠氮钠、１００ ｍＬ／Ｌ 硫代硫酸钠，３７ ℃ 灭活４８ｈ 后，于２ ℃～８ ℃下保存使用［５６］。
１．２．２ 细菌检查 将灭活后的同源组织灭活苗接种在普通琼脂培养基上，３７ ℃ 培养４８ｈ，检查有无细菌生长［７］。
１．２．３ 安全性试验 选择断奶后的健康仔猪５头、妊娠期母猪５ 头，分别肌肉注射同源组织灭活苗２ｍＬ和６ｍＬ，同时设对照组，观察７ｄ，记录体温、食欲是否有异常变化，是否出现流产，注射局部是否出现炎性反应［８］。
１．２．４ 保存与使用 同源组织灭活苗于２ ℃ ～８ ℃冰箱中保存。使用前加入适量的２００ｇ／Ｌ 铝胶生理盐水，哺乳期仔猪２ ｍＬ／头，育成猪４ ｍＬ／头，成年猪６ｍＬ／头［９１０］。
１．２．５ 临床应用 选取体重相近、有临床表现的发病仔猪１６０头，随机分成Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４组，其中Ａ 组为同源组织灭活苗＋ 兽大菌灭注射液，Ｂ 组为兽大菌灭注射液，Ｃ 组为杂症一针注射液，Ｄ 组为对照组，每组４０头。每天用药１次，连用３ｄ（同源组织灭活苗只注射１ 次，其他药物按说明进行），试验猪在相同条件下进行饲养管理。
１．２．６ 测定指标 治疗后１、３、５、７、１０、１５ｄ记录各组的病死情况，计算每组的成活率。记录各组病猪的精神状态、饮食欲、粪便、体温、呼吸等临床症状。
２ 结果
２．１ 细菌检查
将灭活后的同源组织灭活苗接种在普通琼脂培养基上，３７ ℃培养４８ｈ，未有任何细菌生长。
２．２ 安全性试验
对经肌肉注射同源组织灭活苗的５ 头仔猪、５头妊娠期母猪，观察７ｄ。体温、食欲未有任何异常，注射局部也未出现炎性反应；５ 头妊娠期母猪未发生流产现象。
２．３ 临床应用效果
２．３．１ 仔猪的成活率 连续３ｄ用药后不再给药，主要是加强饲养管理，第１５ 天统计各组仔猪成活数。可以看出，Ａ 组成活率为９５．０％，比Ｂ、Ｃ 组成活率分别高１５．０％ 和４５．０％ （P＜０．０１），Ｄ 组成活率为１７．５％ （P＜０．０１），说明同源组织灭活苗配合使用兽大菌灭治疗效果比较好。
２．３．２ 临床症状 连续用药３ｄ后，Ａ 组死亡２头，第５天猪的精神状态、饮食欲、粪便、体温、呼吸等方面已趋于正常，第１０ 天完全恢复正常。Ｂ 组死亡８头，第８天病情趋于平稳。Ｃ 组死亡２２头，第１２天病情趋于平稳。Ｄ 组死亡３３头，期间病猪精神高度沉郁，日渐消瘦，体温偏低，呼吸困难，粪便呈水样、灰白色，走路不稳；耐过的病猪生长缓慢，食欲不振，被毛粗糙、无光泽。
３ 讨论
用于临床预防猪圆环病毒感染的疫苗正在研制开发中，药物治疗本病的效果也不理想，本病给养猪业生产已经带来很大的损失［１１１２］。本次试验采取同源组织灭活苗进行治疗，治愈率达９５．０％以上；配合兽大菌灭，一方面可以控制继发感染，另一方面可以防止注射同源组织灭活苗引起的发热。此治疗方法可供参考使用。
在规模化养猪场中，一旦生产母猪感染了猪圆环病毒，哺乳期和断奶期仔猪就非常容易被感染发病，要彻底治愈相当困难［１３］。通过注射同源组织灭活苗可以刺激机体的免疫系统，提高其免疫力，达到净化该病的目的［１４］。但也存在一定的不足，因为组织灭活苗中存在着除病原之外的大量组织，这些都作为异体蛋白等存在，直接刺激机体，所以组织灭活苗可能存在着一定的副作用［１５］。
同源组织灭活苗可用于本场或者本地区该病的防治，但由于安全性因素，生产中未能推广使用该防治方法。笔者认为，有条件的养殖场在确保安全的情况下，为了减少损失可使用。对于其他地区是否有防控作用还需要进一步研究。同源组织灭活苗制作时，要严格把握甲醛的浓度、用量以及灭活的时间。使用前加入适量的铝胶生理盐水，可以提高其免疫效果［１６］。
大型养猪场使用同源组织灭活苗时，应做小区安全性试验，一旦出现不良性反应，应停止使用。
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