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表1 每个反应体系配置 | 试剂名称 | 体积(μL) | | 2×探针法荧光PCR预混液 | 12.5 | | P72基因和I177L基因探针预混液 | 2 | | 无核酸酶的水 | 5.5 | | 模板 | 5 | | 总计 | 25 | 6.2 荧光PCR扩增条件 50℃2分钟；95℃5分钟；95℃15秒，60℃1分钟，40个循环，在每一循环的60℃时收集FAM和VIC荧光信号。 6.3 结果分析 Ct值由荧光PCR仪软件自动确定。 6.3.1试验成立条件 阳性对照中P72和I177L基因的Ct值均应<35且出现特异性扩增曲线，阴性对照的P72和I177L基因均应无Ct值或Ct值≥40且无特异性扩增曲线。同时满足上述条件时试验结果有效，否则应重新进行试验。 6.3.2 检测结果判定 FAM通道对应P72基因，VIC通道对应I177L基因。被检样品Ct值≤38且出现特异性扩增曲线时，判为目标基因阳性；无Ct值或Ct值≥40时，判为目标基因阴性；38 6.3.3 综合判定 最终判定应结合P72和I177L两个基因的检测结果进行综合分析,具体判定标准见表2。 表2 综合判定标准 | 综合判定结果 | 检测结果 | | P72-FAM | I177L-VIC | | ASFV阳性 | + | + | | ASFV I177L基因缺失毒株阳性 | + | - | | ASFV阴性 | - | - | 注: “+”代表阳性；“-”代表阴性。
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