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三、附录C（规范性附录）非洲猪瘟病毒核酸阳性及阴性对照 C.1阳性对照 阳性对照制备方法：人工合成非洲猪瘟病毒VP72基因片段，序列参见附录B，将VP72基因连接于pMD20-T载体制成阳性质粒pMD20-T-VP72，使用非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液将质粒稀释至浓度为10 000copies/L，保存于-20℃备用。 C.2 阴性对照 阴性对照为非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液。 四、附录D（规范性附录）实时荧光PCR反应液配方 实时荧光PCR反应液配方见表D.1。 表D.1 实时荧光PCR反应液配方 | 组 分 | 1个检测体系的加入量 | | 2×PCR 缓冲液a | 12.5μL | | dNTP（2.5 mmol/L） | 1.0 μL | | 上游引物（10 μmol/L） | 1.0 μL | | 下游引物（10 μmol/L） | 1.0μL | | 探针（10 μmol/L） | 1.0 μL | | Taq 酶b（5U/μL） | 0.5μL | | 去离子水 | 3μL | | 总体积 | 20μL | | 2×PCR 缓冲液a: 参见附录A.1配方。 Taq 酶b：具有5’→3’外切活性。 | 五、附录 E（资料性附录）非洲猪瘟病毒实时荧光PCR扩增实例参考 图D.1给出了非洲猪瘟病毒实时荧光PCR扩增实例。  图E.1 非洲猪瘟病毒核酸实时荧光PCR典型扩增曲线示意图
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